Development of novel molecular assays for the identification of histoplasma capsulatum: targeting protein-coding genes and RRNA

Objetivo: El objetivo principal de esta colaboración internacional es desarrollar y validar nuevos métodos moleculares para el diagnóstico rápido de histoplasmosis y para el seguimiento de los pacientes durante la terapia. Material y métodos: para obtener una base de datos representativa de la secue...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autores Principales: Escobar-Díaz, Fabio A, Agudelo-Calderón, Carlos A
Formato: Objeto de conferencia (Conference Object)
Lenguaje:Inglés (English)
Publicado: Asociación Colombiana de Infectología 2013
Materias:
Acceso en línea:https://repository.urosario.edu.co/handle/10336/25603
https://doi.org/10.1016/s0123-9392(13)70171-1
Descripción
Sumario:Objetivo: El objetivo principal de esta colaboración internacional es desarrollar y validar nuevos métodos moleculares para el diagnóstico rápido de histoplasmosis y para el seguimiento de los pacientes durante la terapia. Material y métodos: para obtener una base de datos representativa de la secuencia de H. capsulatum, extrajimos ADN de 30 cultivos de referencia de este patógeno fúngico que correspondía a ocho de los clados previamente reportados, y amplificamos secuencias conocidas de cuatro loci: los genes que codifican los 100 La proteína kDa y los antígenos H y M, todos específicos para H. capsulatum, y los espaciadores transcritos internos (ITS) entre los genes de rRNA. Todos los productos de PCR se secuenciaron y editaron utilizando Se-quencher 5.0. Para diseñar cebadores y sondas específicos para identificar H. capsulatum mediante PCR cuantitativa (qPCR), alineamos todas las secuencias obtenidas para cada locus diana usando MEGA 5. Resultados: Se estandarizaron diez protocolos de amplificación de qPCR y se evaluaron usando ADN de los cultivos de H. capsulatum. , así como el ADN extraído de otros 37 patógenos médicamente relevantes. Todos los ensayos de PCR bajo evaluación fueron positivos cuando se realizaron con ADN purificado de los diversos cultivos de levadura H. capsulatum, las secuencias amplificadas exhibieron un 100% de identidad con las secuencias de referencia para este hongo, y ninguno de los ADN obtenidos de cultivos de los otros microorganismos dio positivo resultados. Conclusiones: estos ensayos podrían ser útiles en nuestra búsqueda para desarrollar un ensayo qPCR para la detección de H. capsulatum en muestras humanas