Producción de anticuerpos monoclonales que reconozcan proteínas de membrana en células de memoria en aotus spp

A pesar de que varios candidatos a la vacuna contra la malaria se encuentran actualmente ensayos de fase clínica 2 y 3, sus mecanismos de protección inmunológica no se comprenden completamente y la duración de la protección de la vacuna se desconoce en gran medida. El modelo del mono Aotus spp. ha s...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor Principal: Cubides Amézquita, Jenner Rodrigo
Otros Autores: Díaz Arévalo, Diana
Formato: Tesis de maestría (Master Thesis)
Lenguaje:Español (Spanish)
Publicado: Universidad del Rosario 2019
Materias:
Acceso en línea:http://repository.urosario.edu.co/handle/10336/20148
Descripción
Sumario:A pesar de que varios candidatos a la vacuna contra la malaria se encuentran actualmente ensayos de fase clínica 2 y 3, sus mecanismos de protección inmunológica no se comprenden completamente y la duración de la protección de la vacuna se desconoce en gran medida. El modelo del mono Aotus spp. ha sido recomendado por la Organización Mundial de la Salud para el estudio de los candidatos a la vacuna contra la malaria debido a las fuertes similitudes con la patología y los antecedentes genéticos observados en humanos. Sin embargo, la falta de anticuerpos específicos para los marcadores de superficie molecular de las células inmunes en Aotus, ha retrasado los avances en la investigación de la malaria. Entre los anticuerpos monoclonales comerciales (mAbs) para los marcadores moleculares de células T de memoria CD19 +, CD27 + B y CD4 +, CD45RO +, solo los del clon SK3 reconocieron las células T Aotus CD4. En este trabajo, los enfoques bioinformáticos fueron usados para diseñar péptidos antigénicos que corresponden a las regiones extracelulares de las proteínas de membrana CD19, CD27, CD4 y CD45RO, para producir mAbs. 1746 clones de hibridoma resultantes reconocieron los marcadores de superficie molecular de las células inmunes por citometría de flujo y el 30% de ellos se unen al péptido sintético por ELISA. Los mAbs, CD194G12A3G3, CD275F11C11, CD45H3D10 y CD45RO3A8G1 se unieron al 17,7%, 40,1%, 27,4 y 51% de los PBMC de Aotus con alta afinidad (100 ng / 106 células) pero solo mostraron afinidad media a las células humanas (300 ng / 106 células) en análisis FACS. En los ensayos de doble marcaje de las células B y T, mostró que los mAbs CD194G12A3G3 y CD275F11C11 reconocieron el 15,9%, y CD45H3D10 y CD45RO3A8G1 se unieron al 20,6% de las PBMC de Aotus, lo que sugiere que los mAbs reconocieron los marcadores de proteínas de membrana de las células B y T. Estos mAbs son útiles para la identificación y el seguimiento de las células de memoria en el modelo de Aotus para dilucidar qué células inmunes humanas pueden mediar la protección contra la malaria.